Crispr metodolojileri, yararlı ve yeni başlayanlar tarafından kullanımı çok basit olsa da, hala çok karmaşıktır. Sentetik biyoloji konusunda herhangi bir deneyiminiz var mı? Bir gende bulunan ve genin ifade edilme yoğunluğunu ve koşullarını belirleyen farklı unsurları biliyor musunuz? Genetik kod, kodon optimizasyonu, primer tasarımı, klonlama ve ifade vektörleri, CRISPR-Cas9 kompleksinin yapısı hakkında ne biliyorsunuz? Bunlar rastgele kelimeler değil, bırakın kendi hücrenizi, bir memeli hücresini bile başarılı bir şekilde transfekte etmeden önce tamamen hakim olmanız gereken kavramlar.
İstediğiniz bir geni elde etmek için, öncelikle bir gen veritabanında dizisini bulmanız gerekir, bu çok kolaydır ve çevrimiçi olarak ücretsiz olarak kullanılabilir ve uygun bir promotör, bu iki öğeyi ve PCR primerlerini (kısıtlama enzimleri tarafından sindirim için kısıtlama bölgeleri ile) yapıştırın ve bunu özel bir DNA sentez şirketine gönderin. Bunlardan bir sürü var, bazıları diğerlerinden çok daha ucuz.
Aksi takdirde, yalnızca promotör ipliği satın alabilir ve ilgilendiğiniz geni doğal bir kaynaktan PCR ile elde edebilir veya lusiferaz sistemi gibi yaygın bir gen ise geni doğrudan satın alabilirsiniz (ama neden karanlıkta parlamak isteyesiniz ki lol)
Daha sonra bunu bir CRISPR plazmidine ve genomdaki belirli bir konumu hedeflemek için uygun bir kılavuz ipliğe yerleştirebilirsiniz.
Kendi üzerinde böyle bir deney yapan "the thought emporium" youtube kanalına bakabilirsiniz, ancak LÜTFEN projenizi gerçekleştirmeden önce EN AZ BİRKAÇ YIL araştırın