Crispr-metodiken är visserligen användbar och mycket enkel att använda för den initierade, men den är fortfarande mycket komplex. Har du någon erfarenhet av syntetisk biologi? Känner du till de olika element som finns i en gen och som bestämmer intensiteten och förhållandena under vilka den uttrycks? Vad vet du om den genetiska koden, kodonoptimering, primerdesign, kloning och expressionsvektorer, strukturen hos CRISPR-Cas9-komplexet? Det här är inga slumpmässiga ord, det är alla begrepp som du måste behärska till fullo innan du framgångsrikt kan transfektera en mammaliecell, än mindre din egen.
För att få en gen du vill ha måste du först hitta dess sekvens i en gendatabas, vilket är mycket enkelt och fritt tillgängligt online samt en lämplig promotor, klistra ihop dessa två element samt PCR-primrar (med restriktionsställen för nedbrytning av restriktionsenzymer) och skicka detta till ett företag för anpassad DNA-syntes. Det finns en massa av dem, vissa är mycket billigare än andra.
Annars kan du bara köpa promotorsträngen och få din gen av intresse genom PCR från en naturlig källa eller köpa genen direkt om det är en vanlig sådan som luciferassystemet (men varför skulle du vilja lysa i mörkret lol)
Sedan kan du infoga detta i en CRISPR-plasmid samt en lämplig styrsträng för att rikta in sig på en specifik plats i genomet.
Du kan leta upp youtube-kanalen "the thought emporium" som gjorde ett sådant experiment på sig själv men VÄNLIGEN undersöka ditt projekt i MINST ETT FÅ ÅR innan du går igenom det