Metodiky Crispr, hoci sú užitočné a veľmi jednoduché na použitie pre zasvätených, sú stále veľmi zložité. Máte nejaké skúsenosti v oblasti syntetickej biológie? Poznáte rôzne prvky prítomné v géne, ktoré určujú intenzitu a podmienky jeho expresie? Čo viete o genetickom kóde, optimalizácii kodónov, návrhu primerov, klonovaní a expresných vektoroch, štruktúre komplexu CRISPR-Cas9? Toto nie sú náhodné slová, sú to všetko pojmy, ktoré budete musieť plne ovládať pred úspešnou transfekciou cicavčej bunky, nehovoriac o vašej vlastnej.
Ak chcete získať gén, ktorý by ste chceli, budete musieť najprv nájsť jeho sekvenciu v databáze génov, čo je veľmi jednoduché a voľne dostupné na internete, ako aj vhodný promótor, vložiť tieto dva prvky spolu, ako aj PCR primery (s reštrikčnými miestami na trávenie reštrikčnými enzýmami) a poslať to spoločnosti zaoberajúcej sa syntézou DNA na zákazku. Je ich veľa, niektoré sú oveľa lacnejšie ako iné.
Inak by ste si mohli kúpiť len promótorový reťazec a získať svoj gén záujmu pomocou PCR z prírodného zdroja alebo si kúpiť priamo gén, ak je to bežný gén, ako napríklad systém luciferázy (ale prečo by ste chceli svietiť v tme lol)
Potom ho môžete vložiť do plazmidu CRISPR, ako aj do vhodného vodiaceho vlákna, aby ste sa zamerali na konkrétne miesto v genóme.
Môžete si vyhľadať kanál na youtube "the thought emporium", ktorý takýto experiment na sebe urobil, ale PROSÍM, skúmajte svoj projekt aspoň niekoľko rokov, než sa do toho pustíte