Úvod.
Hlavným cieľom tohto výskumu je zhodnotenie možnosti stanovenia hlavných liečiv v biologických tekutinách doma verejne dostupnými expresnými metódami. Tento článok odpovedá na nasledujúce otázky.
- Odhaľujú farmaceutické testy na 3-20 dolárov skutočne skutočnosť užívania deklarovaných látok? (Klasické kombinované testovacie prúžky obsahujú stupnice na stanovenie amfetamínu, metamfetamínu, kokaínu, marihuany, opiátov).
- Mohli by byť tieto testovacie prúžky užitočné na zistenie prítomnosti alfa-PVP a mefedrónu? (V lekárňach neexistujú špecializované testy)
Dôvodom použitia najbežnejších testov v lekárni, ktoré sa dajú ľahko kúpiť, je to, že výskum by mal byť užitočný a má praktické využitie.
Dôležité: mohli by sa použiť aj iné súpravy testov laterálneho prietoku (LFT) s rôznymi označeniami, na spoločnosti výrobcu nezáleží, pretože všetky testovacie prúžky majú rovnaký pracovný mechanizmus a majú porovnateľnú účinnosť.
O LFT.
Laterálne prietokové testy (LFT), známe aj ako laterálne prietokové imunochromatografické testy alebo rýchle testy, sú jednoduché zariadenia určené na zisťovanie prítomnosti cieľovej látky v tekutej vzorke bez potreby špecializovaného a nákladného vybavenia. Tieto testy sa široko používajú v lekárskej diagnostike na domáce testovanie, testovanie v mieste poskytovania zdravotnej starostlivosti alebo na laboratórne použitie. Napríklad domáci tehotenský test je LFT, ktorý zisťuje špecifický hormón. Tieto testy sú jednoduché, ekonomicky výhodné a výsledky sa zvyčajne zobrazia približne za päť až 30 minút. Mnohé laboratórne aplikácie zvyšujú citlivosť jednoduchých LFT použitím ďalšieho špecializovaného zariadenia.
LFT fungujú na rovnakých princípoch ako enzýmové imunosorbentné testy (ELISA). V podstate tieto testy vedú tekutú vzorku po povrchu podložky s reaktívnymi molekulami, ktoré vizuálne vykazujú pozitívny alebo negatívny výsledok. Podložky sú založené na sérii kapilárnych vrstiev, ako sú kúsky porézneho papiera, mikroštruktúrovaný polymér alebo spekaný polymér. Každá z týchto podložiek má schopnosť spontánne transportovať tekutinu (napr. moč, krv, sliny).
Vankúšik na vzorky funguje ako špongia a zadržiava prebytok tekutiny zo vzorky. Po nasiaknutí tekutina prúdi do druhej konjugovanej podložky, v ktorej výrobca uložil lyofilizované bioaktívne častice nazývané konjugáty (pozri ďalej) v matrici soli a cukru. Konjugátová podložka obsahuje všetky činidlá potrebné na optimalizovanú chemickú reakciu medzi cieľovou molekulou (napr. antigénom) a jej chemickým partnerom (napr. protilátkou), ktorý bol imobilizovaný na povrchu častice. Tieto značky označujú cieľové častice pri prechode podložkou a pokračujú cez testovacie a kontrolné línie. Na testovacej línii sa zobrazí signál, často farebný, ako pri tehotenských testoch. Kontrolná línia obsahuje afinitné ligandy, ktoré ukazujú, či vzorka prešla a či sú biomolekuly v konjugovanej podložke aktívne. Po prechode týmito reakčnými zónami sa tekutina dostane do konečného porézneho materiálu, knôtu, ktorý jednoducho slúži ako nádoba na odpad.
LFT fungujú na rovnakých princípoch ako enzýmové imunosorbentné testy (ELISA). V podstate tieto testy vedú tekutú vzorku po povrchu podložky s reaktívnymi molekulami, ktoré vizuálne vykazujú pozitívny alebo negatívny výsledok. Podložky sú založené na sérii kapilárnych vrstiev, ako sú kúsky porézneho papiera, mikroštruktúrovaný polymér alebo spekaný polymér. Každá z týchto podložiek má schopnosť spontánne transportovať tekutinu (napr. moč, krv, sliny).
Vankúšik na vzorky funguje ako špongia a zadržiava prebytok tekutiny zo vzorky. Po nasiaknutí tekutina prúdi do druhej konjugovanej podložky, v ktorej výrobca uložil lyofilizované bioaktívne častice nazývané konjugáty (pozri ďalej) v matrici soli a cukru. Konjugátová podložka obsahuje všetky činidlá potrebné na optimalizovanú chemickú reakciu medzi cieľovou molekulou (napr. antigénom) a jej chemickým partnerom (napr. protilátkou), ktorý bol imobilizovaný na povrchu častice. Tieto značky označujú cieľové častice pri prechode podložkou a pokračujú cez testovacie a kontrolné línie. Na testovacej línii sa zobrazí signál, často farebný, ako pri tehotenských testoch. Kontrolná línia obsahuje afinitné ligandy, ktoré ukazujú, či vzorka prešla a či sú biomolekuly v konjugovanej podložke aktívne. Po prechode týmito reakčnými zónami sa tekutina dostane do konečného porézneho materiálu, knôtu, ktorý jednoducho slúži ako nádoba na odpad.
Existujú dva typy LFT: priama a konkurenčná metóda.
Priama (sendvičová) LFT používa konjugát protilátky a značky nanesený na konjugovanú membránu. Protilátky špecifické pre tento analyt sú imobilizované na testovacej línii a protilátky špecifické pre primárne protilátky sú imobilizované na kontrolnej línii. Keď sa na testovací prúžok nanesie vzorka, ktorá obsahuje analyzovanú látku, a táto vzorka narazí na membránu s konjugátom, analyt sa naviaže na konjugát AT-tag. Potom sa imunitný komplex dostane do testovacej zóny, kde sa naviaže na špecifické protilátky a vytvorí "sendvič" Ab-Ag-Ab-tag. Prebytok neviazaného konjugátu sa viaže na protilátky proti druhu na kontrolnej línii. Preto 2 čiarky na testovacom prúžku znamenajú pozitívny výsledok testu. Aksa vo vzorkenenachádza žiadna analyzovaná látka, konjugát sa viaže na protilátky proti druhu len na kontrolnej línii, čím sa vytvorí jedna línia na testovacom prúžku. Priama metóda LFT sa používa na detekciu vysokomolekulárnych zlúčenín - vírusov vrátane HIV; rôznych hormónov (napríklad v tehotenských testoch), pôvodcov infekčných ochorení.
Kompetičná metódaLFT používaná na stanovenie nízkomolekulových zlúčenín je založená na súťaži medzi analytom a imobilizovaným konjugátom analyt:nosný proteín o obmedzený počet väzbových miest pre špecifické protilátky obsiahnuté v konjugáte Ab-tag. Keď sa aplikuje vzorka obsahujúca analyt, viaže sa na konjugát AT-tag na konjugovanej membráne. Potom imunitný komplex prechádza testovacou zónou, kde je imobilizovaný konjugát analyt:nosný proteín. Imunokomplex sa nemôže viazať na tento konjugát kvôli sterickým prekážkam: nízkomolekulové zlúčeniny majú zvyčajne jednu antigénnu determinantu, a preto majú protilátky jedno väzobné miesto pre antigén, ktoré je už obsadené analytom. Ďalej sa imunitný komplex viaže protilátkami proti druhu na kontrolnej línii. V dôsledku toho neprítomnosť farebného pruhu v testovacej zóne a prítomnosť farby v kontrolnej zóne znamená, že koncentrácia analytu v testovanej vzorke prekračuje jej prahovú hodnotu pre tento test.
Ak sa vo vzorke nenachádza žiadna analyzovaná látka, konjugát Ab-tag sa viaže na konjugát Ag:nosný proteín imobilizovaný v testovacej zóne. Neviazaný konjugát Ab-tag sa dostane do zóny kontrolnej línie a naviaže sa tam s protilátkami proti druhu. Prítomnosť dvoch farebných línií (testovacej a kontrolnej) teda znamená negatívny výsledok analýzy.
Konkurenčný formát LFT sa používa na detekciu nízkomolekulových zlúčenín vrátane metabolitov omamných látok v moči, ústnej tekutine a tkanivových extraktoch.
Kompetičná metódaLFT používaná na stanovenie nízkomolekulových zlúčenín je založená na súťaži medzi analytom a imobilizovaným konjugátom analyt:nosný proteín o obmedzený počet väzbových miest pre špecifické protilátky obsiahnuté v konjugáte Ab-tag. Keď sa aplikuje vzorka obsahujúca analyt, viaže sa na konjugát AT-tag na konjugovanej membráne. Potom imunitný komplex prechádza testovacou zónou, kde je imobilizovaný konjugát analyt:nosný proteín. Imunokomplex sa nemôže viazať na tento konjugát kvôli sterickým prekážkam: nízkomolekulové zlúčeniny majú zvyčajne jednu antigénnu determinantu, a preto majú protilátky jedno väzobné miesto pre antigén, ktoré je už obsadené analytom. Ďalej sa imunitný komplex viaže protilátkami proti druhu na kontrolnej línii. V dôsledku toho neprítomnosť farebného pruhu v testovacej zóne a prítomnosť farby v kontrolnej zóne znamená, že koncentrácia analytu v testovanej vzorke prekračuje jej prahovú hodnotu pre tento test.
Ak sa vo vzorke nenachádza žiadna analyzovaná látka, konjugát Ab-tag sa viaže na konjugát Ag:nosný proteín imobilizovaný v testovacej zóne. Neviazaný konjugát Ab-tag sa dostane do zóny kontrolnej línie a naviaže sa tam s protilátkami proti druhu. Prítomnosť dvoch farebných línií (testovacej a kontrolnej) teda znamená negatívny výsledok analýzy.
Konkurenčný formát LFT sa používa na detekciu nízkomolekulových zlúčenín vrátane metabolitov omamných látok v moči, ústnej tekutine a tkanivových extraktoch.
Jednoduchšie vysvetlenie.
Ak tomu nerozumiete, vysvetlil by som to jednoduchšie. Na začiatku každého testovacieho prúžku sú označené protilátky. Vzhľadom na štruktúru testovacieho prúžku sa po ňom šíri moč a prenáša vzniknuté komplexy do testovacej oblasti, kde sú fixované väzby medzi drogami a bielkovinami. Keďže protilátka z prichádzajúceho imunitného komplexu je už prevzatá drogou z moču, nemôže sa v testovacej zóne prichytiť a presúva sa ďalej do kontrolnej zóny, kde sa viaže na protilátku proti druhu a zafarbí jeden prúžok na stupnici (pozitívny výsledok).
Ak sa v biologickej vzorke nenachádza žiadna droga, protilátky sa pohybujú v moči po testovacom prúžku a zostávajú voľné. Keď sa komplex protilátka-proteín stretne v testovacej oblasti, niektoré označené protilátky sa naň naviažu (objaví sa prvý prúžok), zvyšok sa pohybuje s prúdom moču v kontrolnej oblasti, kde sa tiež naviaže na protilátku proti druhu, zvýraznenie druhého prúžku (2 prúžky - negatívny výsledok). Ak sa čiarka objaví v testovacej zóne, ale neobjaví sa v kontrolnej zóne (mala by sa objaviť vždy) - test je chybný.
Ak sa v biologickej vzorke nenachádza žiadna droga, protilátky sa pohybujú v moči po testovacom prúžku a zostávajú voľné. Keď sa komplex protilátka-proteín stretne v testovacej oblasti, niektoré označené protilátky sa naň naviažu (objaví sa prvý prúžok), zvyšok sa pohybuje s prúdom moču v kontrolnej oblasti, kde sa tiež naviaže na protilátku proti druhu, zvýraznenie druhého prúžku (2 prúžky - negatívny výsledok). Ak sa čiarka objaví v testovacej zóne, ale neobjaví sa v kontrolnej zóne (mala by sa objaviť vždy) - test je chybný.
Látky užívali dobrovoľníci, ktorí dostatočne dlhý čas neužívali nič psychoaktívne, na ich analýzu bol odobratý moč. Tu sú výsledky experimentu.
Experimenty: V roku 2015 sa uskutočnil experiment s látkami, ktoré sa nachádzali v krvi.
AMFETAMÍNHlavné metabolity: amfetamín, 4-hydroxyamfetamín, 4-hydroxynorefedrín, 4-hydroxyfenylacetón, kyselina benzoová, kyselina hippurová, norefedrín, fenylacetón.
COCAINE.
Hlavné metabolity: benzoylekgonín, metylester ekgonínu, ekgonín, norkokaín, p-hydroxykaín, m-hydroxykaín, p-hydroxybenzoylekgonín, m-hydroxybenzoylekgonín.
Ak sa pozriete na test vpravo, vidíte, prečo sa s testovacími prúžkami musí zaobchádzať s kritickým pohľadom. Testovaná osoba v poslednom čase neužívala žiadne PAS, okrem kokaínu.
HEROIN.
Hlavné metabolity: morfín, normorfín, hydromorfón.
MDMA / EXTÁZA.
Hlavné metabolity: 3,4-metyléndioxymetamfetamín (MDMA), 3,4-metyléndioxymetamfetamín (MDA), 4-hydroxy-3-metoxymetamfetamín (HMMA), 4-hydroxy-3-metoxymetamfetamín (HMA).
K dispozícii sú testovacie prúžky na MDMA / extázu, ale je ťažšie ich nájsť. V moči sa našiel amfetamín a metamfetamín. Vysvetľuje sa to ich spoločnou príslušnosťou k tej istej triede, a teda štrukturálnou podobnosťou látok a ich metabolitov. Váhy THC (kanabinoidy) a OPI (opiáty) na druhom teste sa experimentu nezúčastňujú (nie sú aktivované). Podľa ľavej fotografie sa tieto látky v súvislosti s užívaním MDMA nezisťujú.
MEFEDRÓN.
Hlavné metabolity: mefedrón, nor-mefedrón, 4'-karboxy-mefedrón, 1'-dihydro-mefedrón, N-sucinyl-nor-mefedrón.
Zaujímavý komentár redakcie stránky https://www.zoomtesting.co.uk:"Niektorí predajcovia poukazujú na to, že na detekciu mefedrónu možno použiť metamfetamínový test. To však nie je správne. Chemická štruktúra metamfetamínu a mefedronu je odlišná, takže metamfetamínový test nebude platný pre mefedron". Dobre, tak si to overme.
Okrem štandardných látok sa na testovanie barbiturátov použil ďalší jeden testovací prúžok. S týmto testovacím prúžkom zjavne nie je niečo v poriadku. Test zopakoval iný dobrovoľník, ktorý barbituráty ani prípravky s ich obsahom nikdy neužíval, s podobným výsledkom.
ALPHA-PVP (alfa-pyrolidinovalerofenón).
Druhý riadok v okne PCP takmer úplne chýba.
MARIJUANA.
Hlavné metabolity: tetrahydrokanabinol (THC), 11-hydroxy-THC, 11-nor-9-karboxy-THC. Konope sa dobre určuje a vždy len v jeho okienku "THC" (tetrahydrokanabinol), stačí ho preukázať na najjednoduchšom teste.
Záver.
Testy zisťujú drogy v telesných tekutinách oveľa dlhšie, ako sa prejavuje ich psychoaktívny účinok. Sú pomerne lacné, majú dobrú citlivosť a sú len nepatrne horšie ako metódy používané v laboratóriu. Nezabúdajte na svoju bezpečnosť - ak je potrebné skontrolovať si "čistotu" sami, expresné testy budú nepostrádateľné.
Last edited by a moderator: