Введение.
Основной целью данного исследования является оценка возможности определения основных лекарственных препаратов в биологических жидкостях общедоступными экспресс-методами в домашних условиях. Данная статья отвечает на следующие вопросы.
- Действительно ли аптечные тесты на $3-20 выявляют факт употребления заявленных веществ? (Классические комбинированные тест-полоски содержат шкалы для определения амфетамина, метамфетамина, кокаина, марихуаны, опиатов).
- Могут ли эти тест-полоски быть полезны для определения Alpha-PVP и мефедрона? (Специализированных тестов в аптеках не существует).
Причина использования наиболее распространенных аптечных тестов, которые легко купить, заключается в том, что исследование должно быть полезным и иметь практическое применение.
Важно: могут быть использованы другие наборы тестов латерального потока (LFT) с разными этикетками, фирма-производитель не имеет значения, так как любой тест-полоска имеет одинаковый механизм работы и обладает сопоставимой эффективностью.
О ЛФТ.
Латеральные проточные тесты (LFT), также известные как латеральные проточные иммунохроматографические анализы или экспресс-тесты, представляют собой простые устройства, предназначенные для определения наличия целевого вещества в жидком образце без необходимости использования специализированного и дорогостоящего оборудования. Эти тесты широко используются в медицинской диагностике для домашнего тестирования, тестирования в пунктах оказания медицинской помощи или в лабораторных условиях. Например, домашний тест на беременность - это LFT, определяющий специфический гормон. Эти тесты просты, экономичны и обычно показывают результаты примерно через пять-тридцать минут. Многие лабораторные приложения повышают чувствительность простых ЛФТ за счет использования дополнительного специального оборудования.
ЛФТ работают по тем же принципам, что и иммуноферментный анализ (ИФА). По сути, эти тесты проводят жидким образцом по поверхности планшета с реактивными молекулами, которые показывают визуальный положительный или отрицательный результат. В основе планшетов лежит ряд капилляров, например, кусочки пористой бумаги, микроструктурированного полимера или спеченного полимера. Каждая из этих подушечек способна самопроизвольно пропускать жидкость (например, мочу, кровь, слюну).
Прокладка для образца действует как губка и удерживает избыток жидкости для образца. После впитывания жидкость перетекает во вторую подушечку для конъюгатов, в которой производитель хранит сублимированные биологически активные частицы, называемые конъюгатами (см. ниже), в соляно-сахарной матрице. Конъюгат содержит все реагенты, необходимые для оптимизированной химической реакции между целевой молекулой (например, антигеном) и ее химическим партнером (например, антителом), который был иммобилизован на поверхности частицы. Эти метки наносятся на частицы при их прохождении через планшет и далее на тестовую и контрольную линии. На тестовой линии появляется сигнал, часто цветной, как в тестах на беременность. Контрольная линия содержит аффинные лиганды, которые показывают, прошел ли образец и активны ли биомолекулы в конъюгате. После прохождения этих реакционных зон жидкость попадает в последний пористый материал - фитиль, который служит просто контейнером для отходов.
ЛФТ работают по тем же принципам, что и иммуноферментный анализ (ИФА). По сути, эти тесты проводят жидким образцом по поверхности планшета с реактивными молекулами, которые показывают визуальный положительный или отрицательный результат. В основе планшетов лежит ряд капилляров, например, кусочки пористой бумаги, микроструктурированного полимера или спеченного полимера. Каждая из этих подушечек способна самопроизвольно пропускать жидкость (например, мочу, кровь, слюну).
Прокладка для образца действует как губка и удерживает избыток жидкости для образца. После впитывания жидкость перетекает во вторую подушечку для конъюгатов, в которой производитель хранит сублимированные биологически активные частицы, называемые конъюгатами (см. ниже), в соляно-сахарной матрице. Конъюгат содержит все реагенты, необходимые для оптимизированной химической реакции между целевой молекулой (например, антигеном) и ее химическим партнером (например, антителом), который был иммобилизован на поверхности частицы. Эти метки наносятся на частицы при их прохождении через планшет и далее на тестовую и контрольную линии. На тестовой линии появляется сигнал, часто цветной, как в тестах на беременность. Контрольная линия содержит аффинные лиганды, которые показывают, прошел ли образец и активны ли биомолекулы в конъюгате. После прохождения этих реакционных зон жидкость попадает в последний пористый материал - фитиль, который служит просто контейнером для отходов.
Существует два типа LFT: прямой и конкурентный метод.
В прямом (сэндвич) LFT используется конъюгат антитело-метка, нанесенный на конъюгатную мембрану. Специфические для данного аналита антитела иммобилизуются на тестовой линии, а антивидовые антитела, специфичные для первичных антител, иммобилизуются на контрольной линии. Когда образец, содержащий анализируемое вещество, наносится на тестовую полосу и этот образец попадает на мембрану с конъюгатом, аналит связывается с конъюгатом AT-tag. Затем иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где связывается со специфическими антителами, образуя "сэндвич" Ab-Ag-Ab-tag. Избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Поэтому 2 линии на тест-полоске являются положительным результатом теста. Если в образценет анализируемого вещества, конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске. Прямой метод LFT используется для выявления высокомолекулярных соединений - вирусов, в том числе ВИЧ; различных гормонов (например, в тестах на беременность), возбудителей инфекционных заболеваний.
Конкурентный методLFT, используемый для определения низкомолекулярных соединений, основан на конкуренции между аналитом и иммобилизованным конъюгатом аналит:белок-носитель за ограниченное количество мест связывания для специфических антител, содержащихся в конъюгате Ab-tag. При подаче образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом AT-tag на конъюгатной мембране. Затем иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где иммобилизован конъюгат аналит:белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических препятствий: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один сайт связывания антигена, который уже занят аналитом. Далее иммунный комплекс связывается антивидовыми антителами на контрольной линии. В результате отсутствие цветной полосы в тестовой зоне и наличие цвета в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация аналита в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.
Если в образце нет аналита, конъюгат Ab-tag связывается с конъюгатом Ag:белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязанный конъюгат Ab-tag попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа.
Конкурентный формат LFT используется для обнаружения низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических веществ , в моче, ротовой жидкости и тканевых экстрактах.
Конкурентный методLFT, используемый для определения низкомолекулярных соединений, основан на конкуренции между аналитом и иммобилизованным конъюгатом аналит:белок-носитель за ограниченное количество мест связывания для специфических антител, содержащихся в конъюгате Ab-tag. При подаче образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом AT-tag на конъюгатной мембране. Затем иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где иммобилизован конъюгат аналит:белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических препятствий: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один сайт связывания антигена, который уже занят аналитом. Далее иммунный комплекс связывается антивидовыми антителами на контрольной линии. В результате отсутствие цветной полосы в тестовой зоне и наличие цвета в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация аналита в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.
Если в образце нет аналита, конъюгат Ab-tag связывается с конъюгатом Ag:белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязанный конъюгат Ab-tag попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа.
Конкурентный формат LFT используется для обнаружения низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических веществ , в моче, ротовой жидкости и тканевых экстрактах.
Более простое объяснение.
Если вы не понимаете, я объясню проще. В начале каждой тест-полоски находятся меченые антитела. Благодаря структуре тест-полоски, моча растекается по ней, перенося образовавшиеся комплексы в тестовую зону, где фиксируются связки препарат-белок. Поскольку антитело из прибывшего иммунного комплекса уже поглощено препаратом из мочи, оно не может закрепиться в тестовой зоне и перемещается дальше в контрольную зону, где связывается с антивидовым антителом, окрашивая одну полоску на шкале (положительный результат).
Если в биопробе нет наркотика, антитела перемещаются в моче вдоль тест-полоски, оставаясь свободными. Когда комплекс антитело-белок встречается в тестовой зоне, часть меченых антител прикрепляется к нему (появляется первая полоска), остальная часть перемещается с потоком мочи в контрольную зону, где также связывается с антивидовым антителом, окрашивая вторую полоску (2 полоски - отрицательный результат). Если линия появляется в тестовой зоне, но не появляется в контрольной (должна появляться всегда) - тест неисправен.
Если в биопробе нет наркотика, антитела перемещаются в моче вдоль тест-полоски, оставаясь свободными. Когда комплекс антитело-белок встречается в тестовой зоне, часть меченых антител прикрепляется к нему (появляется первая полоска), остальная часть перемещается с потоком мочи в контрольную зону, где также связывается с антивидовым антителом, окрашивая вторую полоску (2 полоски - отрицательный результат). Если линия появляется в тестовой зоне, но не появляется в контрольной (должна появляться всегда) - тест неисправен.
Вещества использовались добровольцами, которые не принимали ничего психоактивного в течение достаточного периода времени, для их анализа была взята моча. Вот результаты эксперимента.
Эксперименты.
АМФЕТАМИНОсновные метаболиты: амфетамин, 4-гидроксиамфетамин, 4-гидроксинорефедрин, 4-гидроксифенилацетон, бензойная кислота, гиппуровая кислота, норэфедрин, фенилацетон.
КОКАИН.
Основные метаболиты: бензоилэкгонин, метиловый эфир экгонина, экгонин, норкокаин, п-гидроксикаин, м-гидроксикаин, п-гидроксибензоилэкгонин, м-гидроксибензоилэкгонин.
Если вы посмотрите на тест справа, то поймете, почему к тест-полоскам нужно подходить критически. Испытуемый в последнее время не употреблял никаких ПАС, кроме кокаина.
ГЕРОИН.
Основные метаболиты: морфин, норморфин, гидроморфон.
МДМА / ЭКСТАЗИ.
Основные метаболиты: 3,4-метилендиоксиметамфетамин (MDMA), 3,4-метилендиоксиамфетамин (MDA), 4-гидрокси-3-метоксиметамфетамин (HMMA), 4-гидрокси-3-метоксиамфетамин (HMA).
Существуют тест-полоски для MDMA / экстази, но их сложнее найти. Амфетамин и метамфетамин были обнаружены в моче. Это объясняется их общей принадлежностью к одному классу и, соответственно, структурным сходством веществ и их метаболитов. Шкалы THC (каннабиноиды) и OPI (опиаты) на втором тесте не участвуют в эксперименте (не активированы). Судя по левой фотографии, эти вещества не обнаруживаются в связи с употреблением MDMA.
МЕФЕДРОН.
Основные метаболиты: мефедрон, нор-мефедрон, 4'-карбокси-мефедрон, 1'-дигидро-мефедрон, N-сукцинил-нор-мефедрон.
Интересный комментарий от редакторов сайта https://www.zoomtesting.co.uk:"Некоторые продавцы указывают, что для обнаружения мефедрона можно использовать тест на метамфетамин. Однако это неверно. Химическая структура метамфетамина и мефа отличается, поэтому метамфетаминовый тест не будет действителен для мефедрона". Что ж, давайте проверим.
Помимо стандартных веществ, еще одна тест-полоска использовалась для проверки на барбитураты. С этой тест-полоской явно что-то не так. Тест был повторен другим добровольцем, который никогда не употреблял барбитураты или содержащие их препараты, с аналогичным результатом.
ALPHA-PVP (альфа-пирролидиновалерофенон).
Вторая линия в окне PCP практически полностью отсутствует.
МАРИХУАНА.
Основные метаболиты: тетрагидроканнабинол (ТГК), 11-гидрокси-ТГК, 11-нор-9-карбокси-ТГК. Каннабис хорошо определяется и всегда только в своем окне "ТГК" (тетрагидроканнабинол), это достаточно продемонстрировать на простейшем тесте.
Вывод.
Тесты обнаруживают наркотики в жидкостях организма гораздо дольше, чем ощущается их психоактивное действие. Они достаточно дешевы, обладают хорошей чувствительностью и лишь незначительно уступают методам, используемым в лаборатории. Помните о своей безопасности - если возникнет необходимость самостоятельно проверить свою "чистоту", экспресс-тесты будут незаменимы.
Last edited by a moderator: