Metodologiile Crispr, deși utile și foarte simple de utilizat de către inițiați, sunt încă foarte complexe. Aveți experiență în domeniul biologiei sintetice? Cunoașteți diferitele elemente prezente într-o genă care determină intensitatea și condițiile în care aceasta este exprimată? Ce știți despre codul genetic, optimizarea codonilor, proiectarea primerilor, clonarea și vectorii de expresie, structura complexului CRISPR-Cas9? Acestea nu sunt cuvinte la întâmplare, sunt concepte pe care va trebui să le stăpâniți pe deplin înainte de a transfeca cu succes o celulă de mamifer, ca să nu mai vorbim de propria celulă.
Pentru a obține o genă dorită, va trebui mai întâi să găsiți secvența acesteia într-o bază de date de gene, ceea ce este foarte ușor și disponibil gratuit online, precum și un promotor adecvat, să lipiți aceste două elemente împreună, precum și primeri PCR (cu situsuri de restricție pentru digestia de către enzimele de restricție) și să trimiteți acest lucru unei companii de sinteză ADN la comandă. Există o grămadă, unele sunt mult mai ieftine decât altele.
În caz contrar, ați putea cumpăra doar lanțul promotor și să obțineți gena de interes prin PCR dintr-o sursă naturală sau să cumpărați gena direct dacă este una comună, cum ar fi sistemul luciferazei (dar de ce ați dori să străluciți în întuneric lol)
Apoi o puteți insera într-o plasmidă CRISPR, precum și un șir ghid adecvat pentru a viza o anumită locație din genom.
Puteți căuta canalul youtube "the thought emporium", care a făcut un astfel de experiment pe el însuși, dar vă RUGĂM să vă cercetați proiectul timp de cel puțin câțiva ani înainte de a merge până la capăt