As metodologias Crispr, embora úteis e muito simples de utilizar pelos iniciados, são ainda muito complexas. Tem alguma experiência em biologia sintética? Conhece os diferentes elementos presentes num gene que determinam a intensidade e as condições em que é expresso? O que sabe sobre o código genético, a otimização de códons, o desenho de primers, a clonagem e os vectores de expressão, a estrutura do complexo CRISPR-Cas9? Estas não são palavras aleatórias, são todos conceitos que terá de dominar completamente antes de transfectar com sucesso uma célula de mamífero, quanto mais a sua própria.
Para obter um gene que deseja, terá primeiro de encontrar a sua sequência numa base de dados de genes, o que é muito fácil e está disponível gratuitamente online, bem como um promotor adequado, colar estes dois elementos, bem como primers de PCR (com locais de restrição para digestão por enzimas de restrição), e enviá-los para uma empresa de síntese de ADN personalizada. Há uma série delas, algumas são muito mais baratas do que outras.
Caso contrário, pode apenas comprar a cadeia promotora e obter o seu gene de interesse por PCR a partir de uma fonte natural ou comprar o gene diretamente se for um gene comum, como o sistema luciferase (mas porque quereria brilhar no escuro lol)
Em seguida, pode inseri-lo num plasmídeo CRISPR, bem como uma cadeia-guia adequada para atingir uma localização específica no genoma.
Podem procurar no canal do youtube "the thought emporium", que fez uma experiência deste tipo com ele próprio, mas POR FAVOR, pesquisem o vosso projeto durante PELO MENOS ALGUNS ANOS antes de o levarem a cabo