Metodologie Crispr, choć użyteczne i bardzo proste w użyciu dla wtajemniczonych, są nadal bardzo złożone. Czy masz jakieś doświadczenie w biologii syntetycznej? Czy znasz różne elementy obecne w genie, które determinują intensywność i warunki jego ekspresji? Co wiesz o kodzie genetycznym, optymalizacji kodonów, projektowaniu primerów, klonowaniu i wektorach ekspresyjnych, strukturze kompleksu CRISPR-Cas9? To nie są przypadkowe słowa, to koncepcje, które trzeba w pełni opanować przed udaną transfekcją komórki ssaka, nie mówiąc już o własnej.
Aby uzyskać pożądany gen, musisz najpierw znaleźć jego sekwencję w bazie danych genów, co jest bardzo łatwe i dostępne online, a także odpowiedni promotor, wkleić te dwa elementy razem, a także startery PCR (z miejscami restrykcyjnymi do trawienia enzymami restrykcyjnymi) i wysłać to do niestandardowej firmy zajmującej się syntezą DNA. Jest ich wiele, niektóre są znacznie tańsze od innych.
W przeciwnym razie możesz kupić tylko nić promotora i uzyskać interesujący cię gen metodą PCR z naturalnego źródła lub kupić gen bezpośrednio, jeśli jest to powszechny gen, taki jak system lucyferazy (ale dlaczego miałbyś chcieć świecić w ciemności?).
Następnie możesz wstawić go do plazmidu CRISPR, a także odpowiednią nić prowadzącą, aby celować w określone miejsce w genomie.
Możesz wyszukać kanał youtube "the thought emporium", który przeprowadził taki eksperyment na sobie, ale PROSZĘ badać swój projekt przez CO NAJMNIEJ KILKA LAT, zanim go zrealizujesz.