Wprowadzenie.
Głównym celem tego badania jest ocena możliwości oznaczania głównych leków w płynach biologicznych za pomocą ogólnodostępnych metod ekspresowych w warunkach domowych. Niniejszy artykuł odpowiada na następujące pytania.
- Czy apteczne testy na $3-20 rzeczywiście ujawniają fakt zażywania deklarowanych substancji? (Klasyczne połączone paski testowe zawierają skale do oznaczania amfetaminy, metamfetaminy, kokainy, marihuany, opiatów).
- Czy te paski testowe mogą być przydatne w przypadku Alpha-PVP i Mefedronu? (W aptekach nie ma specjalistycznych testów).
Powodem użycia najpopularniejszego testu aptecznego, który można łatwo kupić, jest to, że badania powinny być pomocne i mieć praktyczne zastosowanie.
Ważne: można użyć innych zestawów testów przepływu bocznego (LFT) z różnymi etykietami, firma producenta nie ma znaczenia, ponieważ każdy zestaw testowy ma ten sam mechanizm działania i ma porównywalną skuteczność.
O LFT.
Testy przepływu bocznego (LFT), znane również jako testy immunochromatograficzne przepływu bocznego lub szybkie testy, są prostymi urządzeniami przeznaczonymi do wykrywania obecności substancji docelowej w próbce cieczy bez potrzeby stosowania specjalistycznego i kosztownego sprzętu. Testy te są szeroko stosowane w diagnostyce medycznej do testów domowych, testów w punktach opieki lub do użytku laboratoryjnego. Na przykład domowy test ciążowy to LFT, który wykrywa określony hormon. Testy te są proste, ekonomiczne i zazwyczaj pokazują wyniki w ciągu około pięciu do 30 minut. Wiele aplikacji laboratoryjnych zwiększa czułość prostych LFT poprzez zastosowanie dodatkowego dedykowanego sprzętu.
Testy LFT działają na tych samych zasadach, co testy immunoenzymatyczne (ELISA). Zasadniczo testy te polegają na przepuszczeniu próbki cieczy przez powierzchnię elektrody z reaktywnymi cząsteczkami, które wykazują wizualny wynik dodatni lub ujemny. Podkładki są oparte na szeregu łóżek kapilarnych, takich jak kawałki porowatego papieru, mikrostrukturalnego polimeru lub spiekanego polimeru. Każda z tych wkładek ma zdolność do spontanicznego transportu płynu (np. moczu, krwi, śliny).
Podkładka na próbkę działa jak gąbka i zatrzymuje nadmiar płynu próbki. Po nasiąknięciu płyn przepływa do drugiej wkładki koniugatu, w której producent przechowuje liofilizowane bioaktywne cząsteczki zwane koniugatami (patrz poniżej) w matrycy solno-cukrowej. Koniugat zawiera wszystkie odczynniki wymagane do zoptymalizowanej reakcji chemicznej między cząsteczką docelową (np. antygenem) a jej partnerem chemicznym (np. przeciwciałem), który został unieruchomiony na powierzchni cząsteczki. Znaki te oznaczają cząsteczki docelowe, gdy przechodzą one przez podkładkę i przechodzą do linii testowej i kontrolnej. Linia testowa pokazuje sygnał, często kolorowy, jak w testach ciążowych. Linia kontrolna zawiera ligandy powinowactwa, które pokazują, czy próbka przepłynęła, a biocząsteczki w koniugacie są aktywne. Po przejściu przez te strefy reakcji, płyn dostaje się do końcowego porowatego materiału, knota, który działa po prostu jako pojemnik na odpady.
Testy LFT działają na tych samych zasadach, co testy immunoenzymatyczne (ELISA). Zasadniczo testy te polegają na przepuszczeniu próbki cieczy przez powierzchnię elektrody z reaktywnymi cząsteczkami, które wykazują wizualny wynik dodatni lub ujemny. Podkładki są oparte na szeregu łóżek kapilarnych, takich jak kawałki porowatego papieru, mikrostrukturalnego polimeru lub spiekanego polimeru. Każda z tych wkładek ma zdolność do spontanicznego transportu płynu (np. moczu, krwi, śliny).
Podkładka na próbkę działa jak gąbka i zatrzymuje nadmiar płynu próbki. Po nasiąknięciu płyn przepływa do drugiej wkładki koniugatu, w której producent przechowuje liofilizowane bioaktywne cząsteczki zwane koniugatami (patrz poniżej) w matrycy solno-cukrowej. Koniugat zawiera wszystkie odczynniki wymagane do zoptymalizowanej reakcji chemicznej między cząsteczką docelową (np. antygenem) a jej partnerem chemicznym (np. przeciwciałem), który został unieruchomiony na powierzchni cząsteczki. Znaki te oznaczają cząsteczki docelowe, gdy przechodzą one przez podkładkę i przechodzą do linii testowej i kontrolnej. Linia testowa pokazuje sygnał, często kolorowy, jak w testach ciążowych. Linia kontrolna zawiera ligandy powinowactwa, które pokazują, czy próbka przepłynęła, a biocząsteczki w koniugacie są aktywne. Po przejściu przez te strefy reakcji, płyn dostaje się do końcowego porowatego materiału, knota, który działa po prostu jako pojemnik na odpady.
Istniejądwa rodzaje LFT: metoda bezpośrednia i konkurencyjna.
Metoda bezpośrednia (kanapkowa) L FT wykorzystuje koniugat przeciwciała ze znacznikiem naniesiony na membranę koniugatu. Specyficzne dla danego analitu przeciwciała są unieruchomione na linii testowej, a przeciwciała przeciwgatunkowe specyficzne dla przeciwciał pierwotnych są unieruchomione na linii kontrolnej. Gdy próbka zawierająca analizowaną substancję zostanie nałożona na pasek testowy i próbka ta uderzy w membranę z koniugatem, analit wiąże się z koniugatem AT-tag. Następnie kompleks immunologiczny wchodzi do strefy testowej, gdzie wiąże się ze specyficznymi przeciwciałami, tworząc "kanapkę" Ab-Ag-Ab-tag. Nadmiar niezwiązanego koniugatu wiąże się z przeciwciałami przeciwgatunkowymi na linii kontrolnej. Dlatego 2 linie na pasku testowym oznaczają pozytywny wynik testu. Jeśli w próbcenie ma analizowanej substancji, koniugat wiąże się z przeciwciałami przeciwgatunkowymi tylko na linii kontrolnej, tworząc jedną linię na pasku testowym. Bezpośrednia metoda LFT jest stosowana do wykrywania związków o wysokiej masie cząsteczkowej - wirusów, w tym HIV; różnych hormonów (na przykład w testach ciążowych), patogenów chorób zakaźnych.
Kompetycyjna metoda LFT stosowana do oznaczania związków o niskiej masie cząsteczkowej opiera się na konkurencji między analitem a unieruchomionym koniugatem analit:białko nośnikowe o ograniczoną liczbę miejsc wiązania dla specyficznych przeciwciał zawartych w koniugacie Ab-tag. Po nałożeniu próbki zawierającej analit, wiąże się ona z koniugatem AT-tag na membranie koniugatu. Następnie kompleks immunologiczny przechodzi przez strefę testową, w której unieruchomiony jest koniugat analitu z białkiem nośnikowym. Kompleks immunologiczny nie może związać się z tym koniugatem z powodu przeszkód sterycznych: związki o niskiej masie cząsteczkowej mają zwykle jedną determinantę antygenową, a zatem przeciwciała mają jedno miejsce wiązania antygenu, które jest już zajęte przez analit. Następnie kompleks immunologiczny jest wiązany przez przeciwciała przeciwgatunkowe na linii kontrolnej. W rezultacie brak kolorowego pasma w strefie testowej i obecność koloru w strefie kontrolnej wskazuje, że stężenie analitu w badanej próbce przekracza wartość progową dla tego testu.
Jeśli w próbce nie ma analizowanej substancji, koniugat Ab-tag wiąże się z koniugatem Ag:białko nośnikowe unieruchomionym w strefie linii testowej. Niezwiązany koniugat Ab-tag wchodzi do strefy linii kontrolnej i wiąże się tam z przeciwciałami przeciwgatunkowymi. Zatem obecność dwóch kolorowych linii (testowej i kontrolnej) oznacza negatywny wynik analizy.
Konkurencyjny format LFT jest stosowany do wykrywania związków o niskiej masie cząsteczkowej, w tym metabolitów związków narkotycznych w moczu, płynie ustnym i ekstraktach tkankowych.
Kompetycyjna metoda LFT stosowana do oznaczania związków o niskiej masie cząsteczkowej opiera się na konkurencji między analitem a unieruchomionym koniugatem analit:białko nośnikowe o ograniczoną liczbę miejsc wiązania dla specyficznych przeciwciał zawartych w koniugacie Ab-tag. Po nałożeniu próbki zawierającej analit, wiąże się ona z koniugatem AT-tag na membranie koniugatu. Następnie kompleks immunologiczny przechodzi przez strefę testową, w której unieruchomiony jest koniugat analitu z białkiem nośnikowym. Kompleks immunologiczny nie może związać się z tym koniugatem z powodu przeszkód sterycznych: związki o niskiej masie cząsteczkowej mają zwykle jedną determinantę antygenową, a zatem przeciwciała mają jedno miejsce wiązania antygenu, które jest już zajęte przez analit. Następnie kompleks immunologiczny jest wiązany przez przeciwciała przeciwgatunkowe na linii kontrolnej. W rezultacie brak kolorowego pasma w strefie testowej i obecność koloru w strefie kontrolnej wskazuje, że stężenie analitu w badanej próbce przekracza wartość progową dla tego testu.
Jeśli w próbce nie ma analizowanej substancji, koniugat Ab-tag wiąże się z koniugatem Ag:białko nośnikowe unieruchomionym w strefie linii testowej. Niezwiązany koniugat Ab-tag wchodzi do strefy linii kontrolnej i wiąże się tam z przeciwciałami przeciwgatunkowymi. Zatem obecność dwóch kolorowych linii (testowej i kontrolnej) oznacza negatywny wynik analizy.
Konkurencyjny format LFT jest stosowany do wykrywania związków o niskiej masie cząsteczkowej, w tym metabolitów związków narkotycznych w moczu, płynie ustnym i ekstraktach tkankowych.
Prostsze wyjaśnienie.
Jeśli nie rozumiesz, wyjaśnię to w prostszy sposób. Na początku każdego paska testowego znajdują się znakowane przeciwciała. Ze względu na strukturę paska testowego, mocz rozprzestrzenia się wzdłuż niego, przenosząc powstałe kompleksy do obszaru testowego, gdzie wiązania lek-białko są utrwalone. Ponieważ przeciwciało z przybyłego kompleksu immunologicznego jest już wchłaniane przez lek z moczu, nie może się przyczepić w strefie testowej i przesuwa się dalej do strefy kontrolnej, gdzie wiąże się z przeciwciałem przeciwgatunkowym, zabarwiając jeden pasek na skali (wynik pozytywny).
Jeśli w próbce biologicznej nie ma narkotyku, przeciwciała przemieszczają się w moczu wzdłuż paska testowego, pozostając wolne. Gdy kompleks przeciwciało-białko spotyka się w obszarze testowym, niektóre znakowane przeciwciała są do niego przyłączone (pojawia się pierwszy pasek), reszta przemieszcza się wraz z przepływem moczu w obszarze kontrolnym, gdzie również wiąże się z przeciwciałem przeciwgatunkowym, podświetlając drugi pasek (2 paski - wynik negatywny). Jeśli linia pojawia się w strefie testowej, ale nie pojawia się w strefie kontrolnej (powinna pojawiać się zawsze) - test jest wadliwy.
Jeśli w próbce biologicznej nie ma narkotyku, przeciwciała przemieszczają się w moczu wzdłuż paska testowego, pozostając wolne. Gdy kompleks przeciwciało-białko spotyka się w obszarze testowym, niektóre znakowane przeciwciała są do niego przyłączone (pojawia się pierwszy pasek), reszta przemieszcza się wraz z przepływem moczu w obszarze kontrolnym, gdzie również wiąże się z przeciwciałem przeciwgatunkowym, podświetlając drugi pasek (2 paski - wynik negatywny). Jeśli linia pojawia się w strefie testowej, ale nie pojawia się w strefie kontrolnej (powinna pojawiać się zawsze) - test jest wadliwy.
Substancje zostały użyte przez ochotników, którzy nie przyjmowali niczego psychoaktywnego przez wystarczający okres czasu, mocz został pobrany do ich analizy. Oto wyniki eksperymentu.
Eksperymenty.
AMFETAMINAGłówne metabolity: amfetamina, 4-hydroksyamfetamina, 4-hydroksynorefedryna, 4-hydroksyfenyloaceton, kwas benzoesowy, kwas hipurowy, norefedryna, fenyloaceton.
KOKAINA.
Główne metabolity: benzoiloekgonina, ester metylowy ekgoniny, ekgonina, norkokaina, p-hydroksykaina, m-hydroksykaina, p-hydroksybenzoiloekgonina, m-hydroksybenzoiloekgonina.
Jeśli spojrzysz na test po prawej stronie, możesz zobaczyć, dlaczego paski testowe muszą być traktowane z krytycznym punktem widzenia. Badana osoba nie używała ostatnio żadnych PAS, z wyjątkiem kokainy.
HEROINA.
Główne metabolity: morfina, normorfina, hydromorfon.
MDMA / ECSTASY.
Główne metabolity: 3,4-metylenodioksymetamfetamina (MDMA), 3,4-metylenodioksymetamfetamina (MDA), 4-hydroksy-3-metoksymetamfetamina (HMMA), 4-hydroksy-3-metoksyamfetamina (HMA).
Dostępne są paski testowe MDMA / Ecstasy, ale trudniej je znaleźć. Amfetamina i metamfetamina zostały znalezione w moczu. Wyjaśnia to ich wspólna przynależność do tej samej klasy, a tym samym podobieństwo strukturalne substancji i ich metabolitów. Skale THC (kannabinoidy) i OPI (opiaty) w drugim teście nie biorą udziału w eksperymencie (nie są aktywowane). Zgodnie z lewym zdjęciem, substancje te nie są wykrywane w związku z używaniem MDMA.
MDMA
MEPHEDRONE.
Główne metabolity: mefedron, nor-mefedron, 4'-karboksy-mefedron, 1'-dihydro-mefedron, N-sukcynylo-nor-mefedron.
Ciekawy komentarz od redaktorów strony https://www.zoomtesting.co.uk:"Niektórzy sprzedawcy wskazują, że test na metamfetaminę może być użyty do wykrycia mefedronu. Jest to jednak błędne. Struktura chemiczna metamfetaminy i mefedronu jest inna, więc test na metamfetaminę nie będzie prawidłowy dla mefedronu". Cóż, sprawdźmy to.
Oprócz standardowych substancji, kolejny pasek testowy został użyty do testowania barbituranów. Najwyraźniej coś jest nie tak z tym paskiem testowym. Test został powtórzony przez innego ochotnika, który nigdy nie używał barbituranów ani preparatów je zawierających, z podobnym wynikiem.
ALPHA-PVP (alfa-pirolidynowalerofenon).
Druga linia w oknie PCP jest prawie całkowicie nieobecna.
MARIJUANA.
Główne metabolity: tetrahydrokannabinol (THC), 11-hydroksy-THC, 11-nor-9-karboksy-THC. Konopie dobrze określone i zawsze tylko w swoim oknie "THC" (tetrahydrokannabinol), wystarczy wykazać na najprostszym teście.
Wnioski.
Testy wykrywają narkotyki w płynach ustrojowych znacznie dłużej niż odczuwalny jest ich efekt psychoaktywny. Są dość tanie, mają dobrą czułość i tylko nieznacznie ustępują metodom stosowanym w laboratorium. Pamiętajmy o swoim bezpieczeństwie - jeśli zajdzie potrzeba samodzielnego sprawdzenia swojej "czystości", ekspresowe testy będą niezastąpione.
Last edited by a moderator: