Krispr metodikas, lai gan tās ir noderīgas un ļoti vienkārši lietojamas iesvētītajām personām, tomēr ir ļoti sarežģītas. Vai jums ir pieredze sintētiskās bioloģijas jomā? Vai jūs zināt dažādus gēnā esošos elementus, kas nosaka tā izpausmes intensitāti un apstākļus? Ko jūs zināt par ģenētisko kodu, kodonu optimizāciju, praimeru izstrādi, klonēšanu un ekspresijas vektoriem, CRISPR-Cas9 kompleksa struktūru? Tie nav nejauši vārdi, tie visi ir jēdzieni, kas jums būs pilnībā jāapgūst, pirms sekmīgi transfektēsiet zīdītāju šūnu, nemaz nerunājot par savu šūnu.
Lai iegūtu vēlamo gēnu, jums vispirms būs jāatrod tā secība gēnu datubāzē, kas ir ļoti vienkārši un brīvi pieejama tiešsaistē, kā arī piemērots promotors, šie divi elementi jāielīmē kopā, kā arī PCR praimeri (ar restrikcijas vietām, lai tos varētu sagremot ar restriktīvo enzīmu palīdzību), un tas jānosūta pielāgotas DNS sintēzes uzņēmumam. To ir daudz, daži ir daudz lētāki par citiem.
Pretējā gadījumā jūs varētu iegādāties tikai promotora virkni un iegūt interesējošo gēnu ar PCR no dabiska avota vai iegādāties tieši gēnu, ja tas ir izplatīts, piemēram, luciferāzes sistēma (bet kāpēc jūs gribētu spīdēt tumsā lol).
Pēc tam to var ievietot CRISPR plazmīdā, kā arī atbilstošu vadošo virkni, lai noteiktu konkrētu vietu genomā.
Jūs varat apskatīt youtube kanālu "the thought emporium", kas veica šādu eksperimentu pats ar sevi, bet, pirms to īstenojat, PRASIŅOJIET izpētīt savu projektu vismaz dažus gadus.