Ievads.
Šī pētījuma galvenais mērķis ir novērtēt galveno zāļu noteikšanas iespējas bioloģiskajos šķidrumos ar publiski pieejamām ekspresmetodēm mājas apstākļos. Šajā rakstā sniegtas atbildes uz šādiem jautājumiem.
- Vai 3-20 dolāru aptiekas tests patiešām atklāj deklarēto vielu lietošanas faktu? (Klasiskās kombinētās testa lentītes satur skalas amfetamīna, metamfetamīna, kokaīna, marihuānas, opiātu noteikšanai).
- Vai šīs testa sloksnes varētu būt noderīgas alfa-PVP un mefedrona noteikšanai? (Aptiekās nav specializētu testu).
Iemesls, kādēļ tiek izmantoti visizplatītākie aptiekās viegli nopērkami testi, ir tāds, ka pētījumam jābūt noderīgam un praktiski pielietojamam.
Svarīgi: var izmantot citus sānu plūsmas testu (SFT) komplektus ar dažādiem marķējumiem, ražotāja uzņēmumam nav nozīmes, jo jebkura testa komplekta strēmelēm ir vienāds darbības mehānisms un salīdzināma efektivitāte.
Par LFT.
Laterālās plūsmas testi (LFT), kas pazīstami arī kā laterālās plūsmas imūnhromatogrāfijas testi vai ātrās noteikšanas testi, ir vienkāršas ierīces, kas paredzētas mērķa vielas klātbūtnes noteikšanai šķidrā paraugā bez specializēta un dārga aprīkojuma. Šos testus plaši izmanto medicīniskajā diagnostikā, lai veiktu testus mājas apstākļos, aprūpes vietās vai laboratorijās. Piemēram, mājas grūtniecības tests ir LFT, kas nosaka specifisku hormonu. Šie testi ir vienkārši, ekonomiski un parasti rezultāti tiek uzrādīti aptuveni piecu līdz 30 minūšu laikā. Daudzas laboratorijas lietojumprogrammas palielina vienkāršo LFT jutību, izmantojot papildu specializētu aprīkojumu.
LFT darbojas pēc tādiem pašiem principiem kā enzīmu imūnsorbentu testi (ELISA). Būtībā šajos testos šķidrais paraugs tiek novadīts pa spilventiņa virsmu ar reaģējošām molekulām, kas vizuāli uzrāda pozitīvu vai negatīvu rezultātu. Tamponu pamatā ir virkne kapilāru slāņu, piemēram, poraina papīra, mikrostrukturēta polimēra vai saķepināta polimēra gabaliņi. Katram no šiem spilventiņiem ir spēja spontāni transportēt šķidrumu (piemēram, urīnu, asinis, siekalas).
Parauga spilventiņš darbojas kā sūklis un satur parauga šķidruma pārpalikumu. Kad šķidrums ir piesūcināts, tas plūst uz otru konjugāta spilventiņu, kurā ražotājs ir uzglabājis liofilizētas bioloģiski aktīvas daļiņas, ko sauc par konjugātiem (skatīt turpmāk), sāls un cukura matricā. Konjugāta spilventiņā ir visi reaģenti, kas nepieciešami optimizētai ķīmiskai reakcijai starp mērķa molekulu (piemēram, antigēnu) un tās ķīmisko partneri (piemēram, antivielu), kas ir imobilizēts uz daļiņas virsmas. Šie marķējumi iezīmē mērķa daļiņas, kad tās iziet cauri spilventiņam un turpina virzīties uz testa un kontroles līnijām. Testa līnijā parādās signāls, bieži vien krāsa, kā grūtniecības testos. Kontroles līnijā ir afinitātes ligandas, kas parāda, vai paraugs ir izplūdis cauri un konjugētajā spilventiņā esošās biomolekulas ir aktīvas. Pēc šo reakcijas zonu šķērsošanas šķidrums nonāk galīgajā porainajā materiālā - daktilā, kas vienkārši darbojas kā atkritumu tvertne.
LFT darbojas pēc tādiem pašiem principiem kā enzīmu imūnsorbentu testi (ELISA). Būtībā šajos testos šķidrais paraugs tiek novadīts pa spilventiņa virsmu ar reaģējošām molekulām, kas vizuāli uzrāda pozitīvu vai negatīvu rezultātu. Tamponu pamatā ir virkne kapilāru slāņu, piemēram, poraina papīra, mikrostrukturēta polimēra vai saķepināta polimēra gabaliņi. Katram no šiem spilventiņiem ir spēja spontāni transportēt šķidrumu (piemēram, urīnu, asinis, siekalas).
Parauga spilventiņš darbojas kā sūklis un satur parauga šķidruma pārpalikumu. Kad šķidrums ir piesūcināts, tas plūst uz otru konjugāta spilventiņu, kurā ražotājs ir uzglabājis liofilizētas bioloģiski aktīvas daļiņas, ko sauc par konjugātiem (skatīt turpmāk), sāls un cukura matricā. Konjugāta spilventiņā ir visi reaģenti, kas nepieciešami optimizētai ķīmiskai reakcijai starp mērķa molekulu (piemēram, antigēnu) un tās ķīmisko partneri (piemēram, antivielu), kas ir imobilizēts uz daļiņas virsmas. Šie marķējumi iezīmē mērķa daļiņas, kad tās iziet cauri spilventiņam un turpina virzīties uz testa un kontroles līnijām. Testa līnijā parādās signāls, bieži vien krāsa, kā grūtniecības testos. Kontroles līnijā ir afinitātes ligandas, kas parāda, vai paraugs ir izplūdis cauri un konjugētajā spilventiņā esošās biomolekulas ir aktīvas. Pēc šo reakcijas zonu šķērsošanas šķidrums nonāk galīgajā porainajā materiālā - daktilā, kas vienkārši darbojas kā atkritumu tvertne.
Pastāvdivi LFT veidi: tiešā un konkurējošā metode.
Tiešā (sviestveida) LFT izmanto antivielas un marķējuma konjugātu, kas uzklāts uz konjugāta membrānas. Šai analizējamai vielai specifiskas antivielas ir imobilizētas uz testa līnijas, bet pret pirmējām antivielām specifiskas antisugas antivielas ir imobilizētas uz kontroles līnijas. Kad paraugs, kas satur analizējamo vielu, tiek uzklāts uz testa joslas un šis paraugs nokļūst uz membrānas ar konjugātu, analizējamā viela saistās ar AT-marķējuma konjugātu. Tad imūnkomplekss nonāk testa zonā, kur tas saistās ar specifiskām antivielām, veidojot Ab-Ag-Ab-tag "sviestmaizi". Nesaistītā konjugāta pārpalikums saistās ar pret sugas antivielām kontroles līnijā. Tāpēc 2 līnijas uz testa sloksnes ir pozitīvs testa rezultāts. Ja paraugānav analizējamās vielas, konjugāts saistās ar pret sugas antivielām tikai kontroles līnijā, veidojot vienu līniju uz testa sloksnes. Tiešās LFT metodi izmanto, lai noteiktu lielmolekulārus savienojumus - vīrusus, tostarp HIV; dažādus hormonus (piemēram, grūtniecības testos), infekcijas slimību ierosinātājus.
Konkurences LFT metode, ko izmanto zemas molekulmasas savienojumu noteikšanai, ir balstīta uz konkurenci starp analizējamo vielu un imobilizēto analizējamo vielu:nesējbaltuma konjugātu par ierobežotu skaitu saistīšanās vietu specifiskām antivielām, kas atrodas Ab-tag konjugātā. Kad tiek uzklāts analizējamo vielu saturošs paraugs, tas saistās ar AT-tag konjugātu uz konjugāta membrānas. Tad imūnsistēmas komplekss iziet cauri testa zonai, kurā ir imobilizēts analizējamās vielas un nesējbaltuma konjugāts. Imunokomplekss nevar saistīties ar šo konjugātu sterisko šķēršļu dēļ: mazmolekulāriem savienojumiem parasti ir viens antigēna determinants, un attiecīgi antivielām ir viena antigēna saistīšanās vieta, kuru jau aizņem analizējamā viela. Pēc tam imūnsistēmas kompleksu saistās ar kontrollīnijā esošajām pret sugas antivielām. Rezultātā krāsainas joslas neesamība testa zonā un krāsas klātbūtne kontroles zonā norāda, ka analizējamās vielas koncentrācija testa paraugā pārsniedz šim testam noteikto robežvērtību.
Ja paraugā nav analizējamās vielas, Ab-tag konjugāts saistās ar Ag:nesējbaltuma konjugātu, kas imobilizēts testa līnijas zonā. Nesaistītais Ab-tag konjugāts nonāk kontroles līnijas zonā un tur saistās ar pret sugas antivielām. Tādējādi divu krāsainu līniju (testa un kontroles) klātbūtne ir negatīvs analīzes rezultāts.
Konkurences LFT formātu izmanto, lai noteiktu mazmolekulārus savienojumus, tostarp narkotisko savienojumu metabolītus urīnā, mutes šķidrumā un audu ekstraktos.
Konkurences LFT metode, ko izmanto zemas molekulmasas savienojumu noteikšanai, ir balstīta uz konkurenci starp analizējamo vielu un imobilizēto analizējamo vielu:nesējbaltuma konjugātu par ierobežotu skaitu saistīšanās vietu specifiskām antivielām, kas atrodas Ab-tag konjugātā. Kad tiek uzklāts analizējamo vielu saturošs paraugs, tas saistās ar AT-tag konjugātu uz konjugāta membrānas. Tad imūnsistēmas komplekss iziet cauri testa zonai, kurā ir imobilizēts analizējamās vielas un nesējbaltuma konjugāts. Imunokomplekss nevar saistīties ar šo konjugātu sterisko šķēršļu dēļ: mazmolekulāriem savienojumiem parasti ir viens antigēna determinants, un attiecīgi antivielām ir viena antigēna saistīšanās vieta, kuru jau aizņem analizējamā viela. Pēc tam imūnsistēmas kompleksu saistās ar kontrollīnijā esošajām pret sugas antivielām. Rezultātā krāsainas joslas neesamība testa zonā un krāsas klātbūtne kontroles zonā norāda, ka analizējamās vielas koncentrācija testa paraugā pārsniedz šim testam noteikto robežvērtību.
Ja paraugā nav analizējamās vielas, Ab-tag konjugāts saistās ar Ag:nesējbaltuma konjugātu, kas imobilizēts testa līnijas zonā. Nesaistītais Ab-tag konjugāts nonāk kontroles līnijas zonā un tur saistās ar pret sugas antivielām. Tādējādi divu krāsainu līniju (testa un kontroles) klātbūtne ir negatīvs analīzes rezultāts.
Konkurences LFT formātu izmanto, lai noteiktu mazmolekulārus savienojumus, tostarp narkotisko savienojumu metabolītus urīnā, mutes šķidrumā un audu ekstraktos.
Vienkāršāks skaidrojums.
Ja jūs nesaprotat, es paskaidrošu vienkāršāk. Katras testa sloksnes sākumā ir marķētas antivielas. Testa strēmeles struktūras dēļ urīns izplatās pa to, pārnesot radušos kompleksus uz testa zonu, kur tiek fiksētas zāļu un olbaltumvielu saites. Tā kā antiviela no ienākušā imūnkompleksa jau ir pārņēmusi narkotiku no urīna, tā nevar pieķerties testa zonā un pārvietojas tālāk uz kontroles zonu, kur tā saistās ar antivielu pret sugu, iekrāsojot vienu joslu uz skalas (pozitīvs rezultāts).
Ja bioloģiskajā paraugā nav narkotiku, antivielas pārvietojas urīnā pa testa joslu, paliekot brīvas. Kad antivielu un olbaltumvielu komplekss satiekas testa zonā, dažas marķētās antivielas piestiprinās pie tā (parādās pirmā josla), pārējās pārvietojas kopā ar urīna plūsmu kontroles zonā, kur arī saistās ar pret sugas antivielu, izceļot otro joslu (2 joslas - negatīvs rezultāts). Ja līnija parādās testa zonā, bet neparādās kontroles zonā (tai vienmēr vajadzētu parādīties), tests ir kļūdains.
Ja bioloģiskajā paraugā nav narkotiku, antivielas pārvietojas urīnā pa testa joslu, paliekot brīvas. Kad antivielu un olbaltumvielu komplekss satiekas testa zonā, dažas marķētās antivielas piestiprinās pie tā (parādās pirmā josla), pārējās pārvietojas kopā ar urīna plūsmu kontroles zonā, kur arī saistās ar pret sugas antivielu, izceļot otro joslu (2 joslas - negatīvs rezultāts). Ja līnija parādās testa zonā, bet neparādās kontroles zonā (tai vienmēr vajadzētu parādīties), tests ir kļūdains.
Vielas lietoja brīvprātīgie, kuri pietiekami ilgu laiku nebija lietojuši neko psihoaktīvu, to analīzei tika ņemts urīns. Šeit ir eksperimenta rezultāti.
Eksperimenti.
AMFETAMĪNSGalvenie metabolīti: amfetamīns, 4-hidroksiamfetamīns, 4-hidroksinorefedrīns, 4-hidroksifenilacetons, benzoskābe, hipurīnskābe, norephedrīns, fenilacetons.
.
KOKAĪNS.
Galvenie metabolīti: benzoilekgonīns, ekgonīna metilesteris, ekgonīns, norkokaīns, p-hidroksikaīns, m-hidroksikaīns, p-hidroksibenzoilekgonīns, m-hidroksibenzoilekgonīns.
Ja paskatās uz testu labajā pusē, redzams, kāpēc ar testa strēmelēm jārīkojas kritiski. Testējamā persona pēdējā laikā nav lietojusi PAS, izņemot kokaīnu.
HEROĪNS.
Galvenie metabolīti: morfīns, normorfīns, hidromorfons.
MDMA / EKSTAZĪ.
Galvenie metabolīti: 3,4-metilēndioksimetamfetamīns (MDMA), 3,4-metilēndioksiamfetamīns (MDA), 4-hidroksi-3-metoksimetamfetamīns (HMMA), 4-hidroksi-3-metoksiamfetamīns (HMA).
Ir pieejamas MDMA / ekstazī testa sloksnes, taču tās ir grūtāk atrast. Urīnā tika konstatēts amfetamīns un metamfetamīns. Tas skaidrojams ar to kopējo piederību vienai un tai pašai klasei un attiecīgi vielu un to metabolītu strukturālo līdzību. THC (kanabinoīdi) un OPI (opiāti) skalas otrajā testā eksperimentā nepiedalās (nav aktivizētas). Saskaņā ar kreiso fotoattēlu šīs vielas netiek konstatētas saistībā ar MDMA lietošanu.
MEFEDRONS.
Galvenie metabolīti: mefedrons, nor-mefedrons, 4'-karboksi-mefedrons, 1'-dihidro-mefedrons, N-sukvinil-nor-mefedrons.
Interesants komentārs no vietnes https://www.zoomtesting.co.uk redakcijas: "Daži pārdevēji norāda, ka mefedrona noteikšanai var izmantot metamfetamīna testu. Tomēr tas ir nepareizi. Metamfetamīna un mefedrona ķīmiskā struktūra ir atšķirīga, tāpēc metamfetamīna tests nebūs derīgs mefedrona noteikšanai". Labi, pārbaudīsim to.
Papildus standarta vielām tika izmantota vēl viena testa josla, lai pārbaudītu barbiturātus. Ar šo testa strēmelīti acīmredzami kaut kas nav kārtībā. Testu atkārtoja cits brīvprātīgais, kurš nekad nebija lietojis barbiturātus vai tos saturošus preparātus, un rezultāts bija līdzīgs.
ALPA-PVP (alfa-pirolidinovalerofenons).
Otrā līnija PCP logā gandrīz pilnībā nav redzama.
MARIJUANA.
Galvenie metabolīti: tetrahidrokanabinols (THC), 11-hidroksi-THC, 11-nor-9-karboksi-THC. Kaņepes labi noteiktas un vienmēr tikai tās logā "THC" (tetrahidrokanabinols), to pietiek pierādīt ar vienkāršāko testu.
Secinājums.
Testos narkotikas ķermeņa šķidrumos ir konstatētas daudz ilgāk, nekā jūtama to psihoaktīvā iedarbība. Tie ir diezgan lēti, tiem ir laba jutība, un tie tikai nedaudz atpaliek no laboratorijā izmantotajām metodēm. Atcerieties savu drošību - ja rodas nepieciešamība pašam pārbaudīt savu "tīrību", ekspress testi būs neaizstājami.
Last edited by a moderator: