GC-MS-menetelmät lääkkeitä varten

[G.Patton]

Johdanto:

Minulla on laaja kokemus lääkkeiden laadun määrittämisestä kromatografia-massaspektrometrialla. Päätin kirjoittaa tämän ohjeen kemisteille, jotka haluavat aloittaa lääkkeiden testaamisen GC-MS-laitteilla.
Huolimatta kromato-massaspektrometrian laajoista mahdollisuuksista on mahdollisuuksissa rajoituksia. Massadetektorilla, joka on yhdistetty kromatografin kanssa, ei voida määrittää epäorgaanisia aineita, orgaanisia aineita, joiden molekyylipaino on yli 450 Da, tai orgaanisia aineita, joiden kiehumislämpötila on korkea (>350 ◦C).

Laitteen ominaisuudet:

Aluksi on määriteltävä, onko mahdollista tehdä analyysejä kaasukromatografin avulla. Näihin tarkoituksiin voidaan käyttää suosituimpia sopivia GC-MS-järjestelmiä, kuten Agilent 7890 -kaasukromatografia, joka on yhdistetty Agilent 5975C -nelikvadrupolimassadetektoriin, tai Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS:ää. Tärkein ominaisuus, joka sinun on tiedettävä - se on kapillaarikolonnin polaarisuus. Useimmille lääkeaineille tarvitaan poolittomia tai heikosti poolisia kapillaarikolonnia. Esimerkiksi HP-1/DB-1 tai HP-5/DB-5 ovat paras valinta monenlaisiin sovelluksiin. Lisäksi sinun on tiedettävä massa-alue, jonka massanilmaisin voi havaita SCAN-tilassa. Yleensä tarvitaan 30-450 m/z:n alue, joka riittää kaikkien lääketyyppien määrittämiseen. Useimmat niistä voidaan määrittää 30-350 m/z:n välillä.

Näytteen valmistelu:

Kaikki lääkeaineet pysyvät suolamuodossa, koska ne ovat vakaampia, jolloin niitä voidaan säilyttää pitkään ilman rakenteellisia muutoksia. Esimerkiksi amfetamiinissa on typpiatomi, joka on emäs, joka on sitoutunut happoion(eihin) 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Sinun on saatava analyysiaineen vapaa emäs. Jos et myöskään tiedä, mitä ainetta analysoitava aine on, sinun on tehtävä kvalitatiivinen määrityskoe käyttämällä reagensseja, jotka mainitsin aiemmin(Huumausaineiden testausreagenssit).

Yleisvalmistus on melko yksinkertaista. Aseta näytteen aliquotti pulloon ja täytä se puhtaalla liuottimella (CCl4/ CH2Cl2). Valmista noin 10-1000 mkg/ml liuosta. Useimpia huumausaineita ei voida liuottaa hiilitetrakloridiin/dikloorimetaaniin. Tämän jälkeen sinun on lisättävä 1-2 tilavuutta 30-40-prosenttista NaOH/KOH-vesiliuosta tähän kolviin huumausaineliuoksen kanssa ja sekoitettava se perusteellisesti.

Lähes samaa valmistetta käytetään merkkien(LSD, NBOMe, NBOH jne. ) kohdalla. Otetaan merkki, jossa on ilmoitettu määrä ainetta, ja leikataan se pulloon, lisätään puhdasta liuotinta (suositellaan CH2Cl2:ta). Valmistetaan noin 10-1000 mkg/ml liuosta. Sen jälkeen sinun on lisättävä 1-2 tilavuutta 30-40% NaOH/KOH-vesiliuosta tähän pulloon lääkeliuoksen kanssa ja sekoitettava se perusteellisesti.

Saat analysoidun lääkeaineen vapaana olevan emäksen, joka siirtyy orgaanisen liuottimen kerrokseen. Injektoidaan 1 mkl lääkeliuosta ja aloitetaan analyysi.

GC-MS-menetelmät.
Laajalle lääkeainevalikoimalle:

GC-MS-järjestelmä, joka toimii 70 eV:n elektroni-ionisaatiomoodissa. Laitteisto on varustettu 5-prosenttisella fenyyli-metyylisilikoni-kapillaarikolonnilla (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m kalvonpaksuus). Kantokaasuna käytetään heliumia, jonka vakiovirtaus on 1 ml/min. Kromatografiset olosuhteet asetettiin seuraavasti: Uunin lämpötilaa pidettiin 130 ◦C:ssa 2 minuutin ajan, ja se nostettiin 270 ◦C:een 15 ◦C/min. Ruiskutusportti asetetaan 270 ◦C:n lämpötilaan jaetussa tilassa, jaettu raito 25:1. Massadetektori toimii skannaustilassa (skannausalue m/z 30-390).

LSD-, NBOMe- ja NBOH-merkkien osalta:

GC-MS-järjestelmä toimii 70 eV:n elektroni-ionisaatiomoodissa. Laitteisto on varustettu 5-prosenttisella fenyylimetyylisilikoni-kapillaarikolonnilla (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m kalvonpaksuus). Kantokaasuna käytetään heliumia, jonka vakiovirtaus on 1 ml/min. Kromatografiset olosuhteet asetettiin seuraavasti: uunin lämpötila pidetään 40 ◦C:ssa 2 minuutin ajan, nostetaan 210 ◦C:een 15 ◦C/min, nostetaan sen jälkeen 280 ◦C:een 5 ◦C/min ja pidetään 20 minuuttia. Injektioportti asetetaan 280 ◦C:een splitless-tilassa. Massadetektoria käytettiin skannaustilassa (skannausalue m/z 30-450).

Johtopäätökset:
Kuten näette, näytteiden valmistaminen on melko yksinkertaista. Se ei vaadi kalliita reagensseja tai vaikeita käsittelyjä. Tämä menettely on kuitenkin erittäin tärkeä asianmukaisten analyysitulosten saamiseksi.

 

[Cocojamba]

Entä muut GC-MS-järjestelmät? Tai nämä menetelmät toimivat vain Agilentin tai Thermo Scientificin kanssa?

 

[G.Patton]

Itse asiassa ei, voit käyttää mitä tahansa järjestelmää, jossa on samat eritelmät.