Las metodologías Crispr, aunque útiles y muy sencillas de utilizar por los iniciados, siguen siendo muy complejas. ¿Tiene experiencia en biología sintética? ¿Conoce los diferentes elementos presentes en un gen que determinan la intensidad y las condiciones en las que se expresa? ¿Qué sabes del código genético, de la optimización de codones, del diseño de cebadores, de los vectores de clonación y expresión, de la estructura del complejo CRISPR-Cas9? No se trata de palabras al azar, son todos conceptos que tendrás que dominar a la perfección antes de transfectar con éxito una célula de mamífero, por no hablar de la tuya propia.
Para obtener un gen que te gustaría, primero tendrás que encontrar su secuencia en una base de datos de genes, lo que es muy fácil y está disponible gratuitamente en línea, así como un promotor adecuado, pegar estos dos elementos juntos, así como cebadores de PCR (con sitios de restricción para la digestión por enzimas de restricción), y enviar esto a una empresa de síntesis de ADN personalizada. Hay un montón de ellas, algunas son mucho más baratas que otras.
De lo contrario, sólo podrías comprar la cadena promotora y obtener tu gen de interés por PCR de una fuente natural o comprar el gen directamente si es uno común como el sistema de luciferasa (pero ¿por qué querrías brillar en la oscuridad lol)
A continuación, puede insertarlo en un plásmido CRISPR, así como una cadena guía adecuada para dirigirse a un lugar específico en el genoma.
Usted puede buscar el canal de youtube "el emporio pensamiento", que hizo un experimento en sí mismo, pero por favor, la investigación de su proyecto durante al menos un par de años antes de seguir adelante con ella