Introducción.
¿Cómo funciona la cromatografía en capa fina?
Preparación.
Realización del cromatograma.
Tome un frasco de plástico o vidrio, vierta 10-15 ml de agua, 4-5 gotas de solución de alcohol de yodo. Remover durante 7-10 minutos. Escurrir el agua. El yodo se precipita en el agua en los lados del frasco. Colocar este frasco en un recipiente.
Factor de retención
Una vez completada la separación, los compuestos individuales aparecen como manchas separadas verticalmente. Cada mancha tiene un factor de retención (Rf) que es igual a la distancia migrada sobre la distancia total recorrida por el disolvente. La fórmula del Rf es Rf= distancia recorrida por la muestra/distancia recorrida por el disolvente.
El valor Rf puede utilizarse para identificar compuestos debido a su unicidad para cada compuesto. Cuando se comparan dos compuestos diferentes en las mismas condiciones, el compuesto con el valor Rf mayor es menos polar porque no se adhiere a la fase estacionaria tanto tiempo como el compuesto polar, que tendría un valor Rf menor. Los valores de Rf y la reproducibilidad pueden verse afectados por diversos factores, como el grosor de la capa, la humedad en la placa de TLC, la saturación del recipiente, la temperatura, la profundidad de la fase móvil, la naturaleza de la placa de TLC, el tamaño de la muestra y los parámetros del disolvente. Estos efectos provocan normalmente un aumento de los valores de Rf. Sin embargo, en el caso del espesor de la capa, el valor de Rf disminuiría porque la fase móvil se mueve más lentamente hacia arriba en la placa.
Discusión de los resultados
Metanfetamina - 0,55
Mefedrona - 0,65
Conclusiones.
La cromatografía se utiliza para separar mezclas de sustancias en sus componentes. Todas las formas de cromatografía funcionan según el mismo principio. En este artículo, explicaré este método definiendo el Rf de la Anfetamina Metanfetamina y Mefedrona.
Las placas de cromatografía tienen una fase estacionaria (un sólido, o un líquido apoyado sobre un sólido) y una fase móvil (un líquido o un gas). La fase móvil fluye a través de la fase estacionaria y arrastra consigo los componentes de la mezcla. Los distintos componentes se desplazan a velocidades diferentes. Más adelante veremos las razones de ello. La cromatografía en capa fina se realiza exactamente como dice: utilizando una capa fina y uniforme de gel de sílice o alúmina recubierta sobre una pieza de vidrio, metal o plástico rígido. El gel de sílice (o la alúmina) es la fase estacionaria. La fase estacionaria de la cromatografía en capa fina también suele contener una sustancia que es fluorescente a la luz ultravioleta o en cámara de yodo, por razones que se verán más adelante. La fase móvil es un disolvente líquido adecuado o una mezcla de disolventes.
Las placas de cromatografía tienen una fase estacionaria (un sólido, o un líquido apoyado sobre un sólido) y una fase móvil (un líquido o un gas). La fase móvil fluye a través de la fase estacionaria y arrastra consigo los componentes de la mezcla. Los distintos componentes se desplazan a velocidades diferentes. Más adelante veremos las razones de ello. La cromatografía en capa fina se realiza exactamente como dice: utilizando una capa fina y uniforme de gel de sílice o alúmina recubierta sobre una pieza de vidrio, metal o plástico rígido. El gel de sílice (o la alúmina) es la fase estacionaria. La fase estacionaria de la cromatografía en capa fina también suele contener una sustancia que es fluorescente a la luz ultravioleta o en cámara de yodo, por razones que se verán más adelante. La fase móvil es un disolvente líquido adecuado o una mezcla de disolventes.
El gel de sílice es una forma de dióxido de silicio (sílice). Los átomos de silicio están unidos mediante átomos de oxígeno en una estructura covalente gigante. Sin embargo, en la superficie del gel de sílice, los átomos de silicio están unidos a grupos -OH. Por lo tanto, en la superficie del gel de sílice hay enlaces Si-O-H en lugar de enlaces Si-O-Si. El diagrama muestra una pequeña parte de la superficie de sílice. La superficie del gel de sílice es muy polar y, debido a los grupos -OH, puede formar enlaces de hidrógeno con compuestos adecuados a su alrededor, así como fuerzas de dispersión de Van-der-Waals y atracciones dipolo-dipolo.
Necesitas:
1. Jeringa para 5 ml х 4
2. Frasco de plástico para análisis de orina х 4
3. Recipientes grandes de plástico para comida (o un vaso grande y un recipiente de plástico) х 2
4. Placa TLC con capa de gel de sílice de 5x10 cm (puedes cortar una grande con tijeras)
5. Disolventes acetato de etilo, metanol, hexano (se puede sustituir por tetracloruro de carbono), solución acuosa de amoníaco al 10% o superior, solución alcohólica de yodo.
6. Lápiz blando, regla y alicates
No te olvides de los guantes y la mascarilla, realiza el experimento en una sala ventilada.
1. Jeringa para 5 ml х 4
2. Frasco de plástico para análisis de orina х 4
3. Recipientes grandes de plástico para comida (o un vaso grande y un recipiente de plástico) х 2
4. Placa TLC con capa de gel de sílice de 5x10 cm (puedes cortar una grande con tijeras)
5. Disolventes acetato de etilo, metanol, hexano (se puede sustituir por tetracloruro de carbono), solución acuosa de amoníaco al 10% o superior, solución alcohólica de yodo.
6. Lápiz blando, regla y alicates
No te olvides de los guantes y la mascarilla, realiza el experimento en una sala ventilada.
Realización del cromatograma.
1. Hay que preparar una solución fluida de acetato de etilo:metanol:amoníaco 85:10:5. Para 10 ml hay que tomar 8,5 ml de acetato de etilo, 1 ml de metanol y 0,5 ml de solución de amoníaco y mezclarlo.
Solución de
2. Limpiar la placa con gel de sílice con esta solución. Poner la placa en la solución, tiene que ser 3-4 mm de profundidad en gran vaso de precipitados (como en la pic.1). Puedes utilizar pinzas para manipularla cómodamente. Importante: no mojes la placa con agua porque se estropeará. Hay que mantener la placa en la solución hasta que la parte delantera del disolvente llegue al borde superior de la placa.3. Empezaremos con un caso sencillo. Hay cuatro sustancias: anfetamina(A), metanfetamina(L), cafeína(K) y mefedrona(M).
Para este experimento, necesitas obtener la base libre de las drogas. Pon 10-15 mg de la muestra (unos grumos) en un tarro de cristal (plástico), dos gotas puras de solución acuosa de amoníaco. A continuación, vierte 3-4 gotas de hexano o tetracloruro de carbono y agítalo un minuto. La base libre de la droga se diluye en la capa orgánica.
de base libre
4. Ahora tienes que colocarlo en la placa de cromatografía, que se preparó antes. Coge una aguja de una jeringuilla y córtala con unos alicates, como en el ejemplo. Necesitas obtener un borde plano.
Tome una placa limpia y seca y dibuje una línea de lápiz ~5-6 mm hacia arriba desde el borde inferior. Cualquier etiquetado en la placa para mostrar la posición original de la gota también debe ser en lápiz. Si esto se hace con tinta, los colorantes de la tinta también se moverán a medida que se desarrolle el cromatograma. Marque cuatro puntos con la misma distancia entre ellos. Sumergir el extremo de la aguja recortada en la capa orgánica de la primera solución narcótica. Tocar la placa con la punta de la aguja y hacer un pequeño punto de 3-4 mm de diámetro, esperar a que se seque, repetir el procedimiento 10 veces. Repetir las etapas 2, 3 para otras sustancias.
Error común: no hacer gran mancha de grasa, porque su sustancia puede superponerse a otras sustancias durante el experimento.
5. 5. Cuando las manchas de bases libres estén secas, se coloca la placa en una capa poco profunda de disolvente en un vaso de precipitados tapado. Es importante que el nivel de disolvente esté por debajo de la línea de la mancha. Espere hasta que la primera línea de disolvente llegue a 4-5 mm antes del borde superior de la placa y sáquela. Después, trace una línea con lápiz en la línea frontal del disolvente. Séquela al aire.
También puedes usar lámpara UV con longitud de onda de 254 y 365 nm.
Cómo prepear la cámara de yodo.Error común: no hacer gran mancha de grasa, porque su sustancia puede superponerse a otras sustancias durante el experimento.
5. 5. Cuando las manchas de bases libres estén secas, se coloca la placa en una capa poco profunda de disolvente en un vaso de precipitados tapado. Es importante que el nivel de disolvente esté por debajo de la línea de la mancha. Espere hasta que la primera línea de disolvente llegue a 4-5 mm antes del borde superior de la placa y sáquela. Después, trace una línea con lápiz en la línea frontal del disolvente. Séquela al aire.
Сhromatography
6. El cromatograma se coloca en un recipiente cerrado (como otro vaso de precipitados cubierto con un vidrio de reloj o grandes recipientes de plástico) junto con unos pocos cristales de yodo. El vapor de yodo del recipiente reacciona con las manchas del cromatograma. Las sustancias que te interesan pueden aparecer como manchas coloreadas. Trazalas con un lápiz y dibuja puntos en el centro de cada mancha.
Tome un frasco de plástico o vidrio, vierta 10-15 ml de agua, 4-5 gotas de solución de alcohol de yodo. Remover durante 7-10 minutos. Escurrir el agua. El yodo se precipita en el agua en los lados del frasco. Colocar este frasco en un recipiente.
Factor de retención
Una vez completada la separación, los compuestos individuales aparecen como manchas separadas verticalmente. Cada mancha tiene un factor de retención (Rf) que es igual a la distancia migrada sobre la distancia total recorrida por el disolvente. La fórmula del Rf es Rf= distancia recorrida por la muestra/distancia recorrida por el disolvente.
En el experimento he obtenido tres manchas en lugar de las cuatro esperadas. La repetición del experimento muestra que la cafeína no se eluye con la solución de cetato de etilo:metanol:amoníaco 85:10:5. Se ha comprobado experimentalmente que esta solución es adecuada para eluir la cafeína. Experimentalmente aprobado que esta solución adecuada para la elución de drogas como la anfetamina, metanfetamina y mefedrona.
Rf de las drogas estudiadas.
Anfetamina - 0.53Metanfetamina - 0,55
Mefedrona - 0,65
Explicación.
Tengo dos placas con resultados. Dos distancias medidas entre el punto de inicio y la mitad de la mancha rodeada. El punto de anfetamina estaba a 42 en la primera placa y a 49 mm en la segunda desde la línea de inicio, la línea frontal del disolvente estaba a 85 y 86 mm respectivamente. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Luego calculé la media aritmética 0,53. Los mismos cálculos se hicieron para otras sustancias.
Tengo dos placas con resultados. Dos distancias medidas entre el punto de inicio y la mitad de la mancha rodeada. El punto de anfetamina estaba a 42 en la primera placa y a 49 mm en la segunda desde la línea de inicio, la línea frontal del disolvente estaba a 85 y 86 mm respectivamente. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Luego calculé la media aritmética 0,53. Los mismos cálculos se hicieron para otras sustancias.
Conclusiones.
Como muestra el experimento, puedes medir el Rf de tu fármaco y compararlo con una sustancia conocida en la misma placa. Haga una mancha de la base libre de su droga y 1-4 manchas de otras drogas para comprobar el Rf. Si las manchas están a la misma distancia de la línea de salida, probablemente se trate de la misma sustancia. Además, si obtienes varias manchas de tu droga, probablemente tengas una mezcla de sustancias. Algunas drogas tienen varias manchas porque son una mezcla de droga y subproductos de síntesis. Sin embargo, puedes compararlas con otras drogas utilizando la cromatografía en capa fina.
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