Die Crispr-Methoden sind zwar nützlich und für Eingeweihte sehr einfach anzuwenden, aber dennoch sehr komplex. Haben Sie Erfahrung mit der synthetischen Biologie? Kennen Sie die verschiedenen Elemente in einem Gen, die die Intensität und die Bedingungen, unter denen es exprimiert wird, bestimmen? Was wissen Sie über den genetischen Code, die Codon-Optimierung, das Design von Primern, Klonierungs- und Expressionsvektoren, die Struktur des CRISPR-Cas9-Komplexes? Das sind alles Konzepte, die Sie vollständig beherrschen müssen, bevor Sie eine Säugetierzelle erfolgreich transfizieren können, ganz zu schweigen von Ihrer eigenen.
Um ein gewünschtes Gen zu erhalten, müssen Sie zunächst dessen Sequenz in einer Gendatenbank finden, was sehr einfach und online frei verfügbar ist, sowie einen geeigneten Promotor, diese beiden Elemente sowie PCR-Primer (mit Restriktionsstellen für den Verdau durch Restriktionsenzyme) zusammenfügen und diese an ein Unternehmen für maßgeschneiderte DNA-Synthese schicken. Davon gibt es eine ganze Reihe, manche sind viel billiger als andere.
Andernfalls könnten Sie nur den Promotorstrang kaufen und Ihr gewünschtes Gen durch PCR aus einer natürlichen Quelle gewinnen oder das Gen direkt kaufen, wenn es sich um ein gängiges Gen handelt, wie z. B. das Luciferase-System (aber warum sollten Sie im Dunkeln leuchten wollen lol)
Dann können Sie dieses Gen in ein CRISPR-Plasmid einfügen, ebenso wie einen geeigneten Führungsstrang, um eine bestimmte Stelle im Genom zu erreichen.
Sie können sich den YouTube-Kanal "the thought emporium" ansehen, der ein solches Experiment an sich selbst durchgeführt hat, aber BITTE recherchieren Sie Ihr Projekt mindestens ein paar Jahre lang, bevor Sie es in Angriff nehmen.