Crispr-metodologier er stadig meget komplekse, selvom de er nyttige og meget enkle at bruge for den indviede. Har du nogen erfaring med syntetisk biologi? Kender du de forskellige elementer i et gen, som bestemmer intensiteten og betingelserne for, hvordan det kommer til udtryk? Hvad ved du om den genetiske kode, kodonoptimering, primerdesign, kloning og ekspressionsvektorer, strukturen af CRISPR-Cas9-komplekset? Det er ikke tilfældige ord, det er alle begreber, som du skal beherske fuldt ud, før du med succes kan transfektere en pattedyrcelle, for slet ikke at tale om din egen.
For at få et gen, du gerne vil have, skal du først finde dets sekvens i en gendatabase, hvilket er meget nemt og frit tilgængeligt online, samt en passende promotor, sætte disse to elementer sammen samt PCR-primere (med restriktionssteder til fordøjelse med restriktionsenzymer) og sende det til et firma, der laver specialfremstillet DNA-syntese. Der er mange af dem, og nogle er meget billigere end andre.
Ellers kan du kun købe promotorstrengen og få dit gen af interesse ved PCR fra en naturlig kilde eller købe genet direkte, hvis det er et almindeligt gen som luciferasesystemet (men hvorfor skulle du ønske at lyse i mørket?).
Derefter kan du indsætte det i et CRISPR-plasmid sammen med en passende guidestreng for at ramme et bestemt sted i genomet.
Du kan slå op på youtube-kanalen "the thought emporium", som udførte et sådant eksperiment på sig selv, men undersøg venligst dit projekt i MINDST ET PAR ÅR, før du gennemfører det.