Metodiky Crispr jsou sice užitečné a pro zasvěcené velmi jednoduché na použití, ale přesto velmi složité. Máte nějaké zkušenosti se syntetickou biologií? Znáte různé prvky přítomné v genu, které určují intenzitu a podmínky, za nichž se exprimuje? Co víte o genetickém kódu, optimalizaci kodonů, návrhu primerů, klonování a expresních vektorech, struktuře komplexu CRISPR-Cas9? To nejsou náhodná slova, jsou to všechno pojmy, které budete muset plně zvládnout před úspěšnou transfekcí savčí buňky, natož své vlastní.
Chcete-li získat gen, který byste chtěli, budete muset nejprve najít jeho sekvenci v genové databázi, což je velmi snadné a volně dostupné na internetu, stejně jako vhodný promotor, vložit tyto dva prvky dohromady, stejně jako PCR primery (s restrikčními místy pro štěpení restrikčními enzymy), a poslat to společnosti zabývající se syntézou DNA na zakázku. Je jich celá řada, některé jsou mnohem levnější než jiné.
Jinak byste si mohli koupit pouze promotorové vlákno a získat svůj zájmový gen pomocí PCR z přírodního zdroje nebo si koupit přímo gen, pokud je to běžný gen, například systém luciferázy (ale proč byste chtěli svítit ve tmě lol)
Pak jej můžete vložit do plazmidu CRISPR a také do vhodného vodicího řetězce, abyste se zaměřili na konkrétní místo v genomu.
Můžete se podívat na youtube kanál "the thought emporium", který takový experiment na sobě provedl, ale PROSÍM, zkoumejte svůj projekt alespoň několik let, než se do něj pustíte